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随着我国饲料工业的发展，鱼粉的需要量逐年增加，鱼粉的质量问题越来越引起饲料行业、养殖业的重视。鱼粉是水产饲料的主要蛋白源，尤其含有动物生长所必需的氨基酸，由于鱼粉用量大，价格高，有些厂家掺杂使假、以次充好，使鱼粉质量参差不齐，这一行为业给鱼粉品质分析带来了一定困难。因此，有必要建立一个有效的手段对鱼粉中氨基酸进行定量分析。

鱼粉图片

以下是赛智科技利用LC-10Tvp高效液相色谱仪对鱼粉进行的HPLC检测方案。

     （本应用方案请勿转载，侵权必究）

1、仪器与试剂

    1.1仪器、设备

    LC-10Tvp高效液相色谱仪

    Vertex 色谱柱AA：250mm×4.6mm×5μm

    分析天平

    恒温箱，温度控制在110±1℃

    微量进样器，（20μL）一支

    漩涡混匀器

    氮吹仪

    针头过滤器

    微孔滤膜：0.45µm

    1.2试剂

    盐酸溶液，6mol/L:将优级纯盐酸与水按1:1(V/V)混合。

    氨基酸标准工作溶液。

    乙腈，色谱纯。

    三水合醋酸钠，优级纯。

    冰醋酸。

    正己烷，色谱纯。

2、供试品溶液和对照品溶液的制备

对照品溶液的制备   取氨基酸混合工作标液500ul，用水稀释至5ml，即得。

供试品溶液的制备   称取试样50-100mg（准确至0.1mg）于据塞试管中，加入6.0mol/l盐酸10ml，混匀，充分提取10min，盖紧盖子。将样品置于110℃恒温干燥箱中，水解22-24h。冷却后充分混匀，过滤。根据实验要求移取适量上清液，60℃下氮气吹干，备用。以下按照衍生方法包进行。

方法包衍生方法：将恒温水浴锅预热至50±1℃，分别将A、B两种衍生试剂用稀释至原来浓度的1/5倍。精密量取上述对照品1ml，至于试管中，加入稀释后的A溶液0.5ml和稀释后的B溶液0.5ml，摇匀；在50±1℃的水浴中加热45分钟，取出，加入正己烷溶液1ml，振摇；并用孔径为0.45μm有机膜过滤，放置30min后，取澄清的下层液进行分析实验。供试品的衍生步骤与对照品相同。

3、色谱条件

　  色谱柱：AA  4. 6 mmx250 mm，粒度5 µm

    流动相：

    流动相A：0.1mol/L醋酸钠溶液（pH6.5）：乙腈=93:7

    配置方法：准确称取三水合醋酸钠13.6g于1000ml水中，搅拌均匀，溶解，用冰醋酸或氢氧化钠溶液调节pH值至6.5； 准确量取配制好的三水合醋酸钠溶液465ml和乙腈35ml，混合均与，抽滤，过0.45μm滤膜。

    流动相B：水：乙腈=20:80。

    配制方法：准确量取水100ml和乙腈400ml，混合均匀，抽滤，过0.45μm滤膜。

    波长：254nm

    流速：1. 0 mL/min

　  梯度设置：

4、测定法

分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20ul，注入液相色谱仪，测定，即得

5、谱图