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烟酸（尼克酸或维生素PP）是参与体内酶系统的一种维生素，对机体的碳水化合物、脂肪和蛋白质代谢起主要作用，当肌体缺乏烟酸时则可引起新陈代谢的障碍；叶酸是一种广泛存在于绿色蔬菜中的B族维生素，缺乏叶酸会使得雏鸡生长不良，羽毛不正常，贫血和骨短粗症，母鸡所产的蛋在孵化时，胚胎死亡率高等。

赛智科技参考国标（GB/T 17813-1999），利用全新高性能的LC-10Tvp高效液相色谱仪，经实践检测可提供复合预混料中烟酸和叶酸的HPLC检测方案，得出的结果准确可靠，检出限好，适用于复合预混合饲料和维生素预混合饲料中烟酸和叶酸的测定，仅供广大用户参考。

以下是复合预混料中烟酸和叶酸的测定的详细检测方法。

1　 仪器与试剂

1.1 仪器
　　LC-10Tvp高效液相色谱仪
　　Vertex 色谱柱　250mm×4.6mm×5μm
　　实验室常用仪器设备
　　超声波水浴
　　超纯水装置
　　离心机（3000r/min）

1.2 试剂
　　己烷磺酸钠。
　　磷酸氢二钾。
　　磷酸二氢钾。
　　冰乙酸，优级纯。
　　三乙胺，色谱纯。
　　甲醇，色谱纯。
　　乙腈，色谱纯。
　　碳酸钠。
　　烟酸标准品：含量≥99%。
　　叶酸标准品：含量≥99%。

2 　测定原理
　　试样中的烟酸、 叶酸用水-甲醇-乙酸混合溶液提取，将滤液注入高效液相色谱反相柱上进行分离，用紫外检测器在280nm波长处定量测定。

3 　试样溶液的制备
　　称取维生素预混料或者复合预混料适量，于100ml棕色容量瓶中，加入碳酸钠溶液，浸湿试样加适量提取液混匀，于超声波水浴上振荡提取，用提取液定容至刻度，混合均匀，过滤或离心，再经0.45μm过滤膜过滤至带盖小瓶中，调整试验溶液的浓度，待机测定。

4 　色谱条件
　　色谱柱：Vertex 色谱柱　250mm×4.6mm×5μm；
　　流动相：2%乙腈磷酸缓冲液；
　　流速：1.4mL/min；
　　温度：室温；
　　进样量：20μL；
　　检测波长：280nm。