近期，随着经济的复苏，维生素类饲料添加剂销售量大大增加，全球原料药大制造商帝斯曼最近也宣布对饲料维生素A涨价6%，所以饲料中维生素A的检测就显得非常紧急和重要。

赛智科技参考国标（GB/T 17817-2010），利用全新高性能的LC-10Tvp高效液相色谱仪，经实践检测可提供饲料中维生素A的HPLC检测方案，得出的结果准确可靠，检出限好，适用于配合饲料、浓缩饲料、复合预混合饲料、维生素预混合饲料中维生素A的测定，方案仅供参考。

以下是维生素A的测定的详细检测方法。

1、仪器与试剂

1.1 仪器

LC-10Tvp高效液相色谱仪

Vertex 色谱柱：150mm×4.6mm×5μm；

分析天平，感量为分别为0.001g，0.0001g，0.00001g；

圆底烧瓶，带回流冷凝器；

恒温水浴锅；

旋转蒸发器；

超纯水器。

1.2 试剂

无水乙醚：不含过氧化物；

无水乙醇；

正己烷，色谱纯；

异丙醇，色谱纯；

甲醇，色谱纯；

2,6-二叔丁基对甲酚（BHT）；

无水硫酸钠；

氮气（纯度99%）；

碘化钾溶液；

淀粉指示液；

硫代硫酸钠溶液；

氢氧化钾溶液；

L-抗坏血酸纯品；

酚酞指示剂；

1,4-二氧六环；

维生素A乙酸酯标准品：含量≥99%；

维生素A标准贮备液；

维生素A标准工作液。

2、试样溶液的制备

2.1 皂化

称取试样配合饲料或浓缩饲料适量，置入圆底烧瓶中，加L-坏血酸乙醇溶液，使试样完全分散、浸湿，加氢氧化钾溶液，混匀，置于水浴上回流，不时震荡防止试样粘附在瓶壁上，皂化结束，分别用无水乙醇、水自冷凝管顶端冲洗其内部，取出烧瓶冷却至40℃。

2.2 提取

定量转移全部皂化液于盛有无水乙醚的分液漏斗中，用蒸馏水分2次~3次冲洗圆底烧瓶并入分液漏斗，加盖、放气，随后混合，激烈震荡，静置、分层。转移水相于第二个分液漏斗中，分次用乙醚重复提取两次，弃去水相，合并三次乙醚相。用蒸馏水多次洗涤乙醚提取液至中性，初次水洗时轻轻旋摇，防止乳化。乙醚提取液通过无水硫酸钠脱水，转移到棕色容量瓶中，加BHT使之溶解，用乙醚定容至刻度。以上操作均在避光通风柜内进行。

2.3 浓缩

从乙醚提取液中分取一定体积置于旋转蒸发器烧瓶中，在水浴温度约50℃，部分真空条件下蒸发至干或用氮气吹干。残渣用甲醇溶解并稀释，离心或通过0.45μm过滤膜过滤，用于高效液相色谱仪分析。以上操作均在避光通风柜内进行。

3、色谱条件

色谱柱：VertexC18（4.6 mm×250 mm×5 μm）

流动相：甲醇：水=98:2

流速为：1.0mL/min

进样量：20μL

检测波长为：326 nm

柱温：35 ℃

4、色谱图