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百事可乐被指使用致癌色素，据英国《金融时报》7月4日报道,美国监督机构——环境健康中心表示,在美国10个州购买的百事可乐含有4-甲基咪唑,这是一种与啮齿动物肺癌肿瘤有关的化学物质。目前国家风险评估中心正在对可乐焦糖色素含有的4-甲基咪唑是否会对人体产生影响进行评估，我国还将修订焦糖色素限量标准。据了解，在我国现行食品质量国标中，可乐中焦糖色素没有限量标准，只规定按生产需要适量使用。

4-甲基咪唑源于生产饮料所用的焦糖色素中，焦糖色素与其他人工合成色素相比，具备价格价廉、安全无毒等优点，被越来越广泛地应用于酱油、醋、可乐、冷饮等食品工业中。然而，因为焦糖色素在制造过程中往往要使用氨或铵盐，这种物质和其它原辅料发生反应，生成附带产物4-甲基咪唑。4-甲基咪唑为神经毒，能引起惊厥。长期食用会导致动物长肿瘤，有可能会对人体造成致癌风险。而据英国《每日邮报》报道，美国一公益组织检测全球多个国家的可口可乐中4-甲基咪唑的含量，发现美国355毫升可乐中4-甲基咪唑含量为4微克，中国为56微克,英国为135微克，巴西则高达267微克。

针对“可乐致癌”事件，赛智科技第一时间参考大量的文献方法，利用赛智科技全新高性能的LC-10Tvp型高效液相色谱仪，经实践检验可提供焦糖色素中4-甲基咪唑的HPLC检测方案，得出的结果准确可靠，检出限好，仅供广大用户参考。

LC-10Tvp高效液相色谱仪是赛智科技（杭州）有限公司为了快速地满足多样化的客户需求，在原有的STI501液相色谱仪的基础上经过优化，利用美国先进技术开发设计，国内加工生产的的一款新型的液相色谱仪。LC-10Tvp等度高效液相色谱仪可广泛应用于研究开发、医药检验、食品检测、化工分析、环境监测等众多分析领域。

    以下是高效液相色谱法对焦糖色素中的4-甲基咪唑的详细检测方法。

（本应用方案请勿转载，侵权必究）

1、仪器与试剂

    1.1仪器、设备

    LC-10Tvp高效液相色谱仪

    Vertex 色谱柱：150mm×4.6mm×5μm

    分析天平

    旋转蒸发仪

    分液漏斗250ml

    振荡器

    针头过滤器

    微孔滤膜：0.45µm

    1.2试剂

    甲醇（色谱纯）

    无水乙醇

    三氯甲烷

    三氯甲烷-无水乙醇萃取液（80: 20)：移取80 mL的三氯甲烷及20 mL的无水乙醇混合均匀备用

    碳酸钠

    碳酸钠溶液（100 g/L )：准确吸取碳酸钠100 g于1 000 mL容量瓶中，用水定容至刻度

    庚烷磺酸钠

    磷酸二氢钾

    磷酸

    磷酸二氢钾缓冲液（0.05mol/L）：称取磷酸二氢钾6.8g，庚烷磺酸钠1g于1000ml容量瓶中，加水900ml，用稀磷酸调pH至3.5，用水定容至1000ml。 

    4-甲基咪唑标准品：纯度>99 %o

    4-甲基咪唑标准储备溶液：准确称取0. 1 000 g 4-甲基咪唑于100 mL的容量瓶中，用流动相溶解定容至刻度。4-甲基咪唑含量1. 0 mg/mL，作为贮备溶液。

2、试样溶液的制备

准确称取3g样品（精确至0. 001 g)，加15mL水溶解，移入250 mL分液漏斗中，加100 g/L碳酸钠溶液15 mL，加三氯甲烷-无水乙醇萃取液60 mL，剧烈振摇5 min。静置分层后，将有机相移入另一分液漏斗中，水相再按同样方法萃取一次，合并有机相；用100 g/L碳酸钠溶液洗涤提取液3次，每次30mL。然后将有机相通过无水硫酸钠滤入旋转蒸发瓶中，50℃浓缩至近干，取下，以水溶解残渣并定容至10ml，经0.45µm微孔膜过滤后供HPLC分析。

3、色谱条件

    色谱柱：C18, 4. 6 mmx250 mm，粒度5 µm

    流动相：甲醇: 0. 05 mol/L磷酸二氢钾缓冲液（(pH 3.5，含0. 1％庚烷磺酸钠）=5: 95

    波长：210nm

    流速：1. 0 mL/min

4、样品测定

    标准曲线：将4-甲基咪唑标准溶液配置成一系列标准溶液，分别进标准系列溶液各10µL，进行HPLC分析，然后以峰面积为纵坐标，以4-甲基咪唑的含量为横坐标，绘制标准曲线。

    样品测定：吸取10 µL试样溶液进行HPLC分析，测定其峰面积，从标准曲线查得测定液中4-甲基咪唑的含量。

5、4-甲基咪唑的标准色谱图